Sterilisatie van media

LB en LB-Agar kunnen gesteriliseerd worden in een snelkookpan of au bain-marie. In geval van nood in een microgolf oven.

• Om te starten: de poeders goed mengen met water. Let op: de agar zal niet oplossen.
• Tip: vul de flessen/ erlenmeyers niet te vol (tot 80% van de volumen).
• Tip: draai de fles NIET volledig dicht voor de sterilisatie, draai de deksel een kwart terug. Na sterilisatie en na afkoeling, kunt je het deksel volledig dicht draaien.
• Tip: plaats een stuk aluminium folie op de fles/erlenmeyer BEHALVE voor in de microgolf.

De beste steriliseermethode is: laten koken voor 20 minuten in een snelkookpan (start ministerie eens de kookpan onder druk). Dan laten afkoelen op een onderzetter tot het het geheel nog warm is (ongeveer 60°) maar zeker niet kokend. De agar moet nu opgelost zijn.

Een alternatief (maar minder goed) is de flessen/erlenmeyers in een bain-marie te plaatsen en te laten koken voor 20 minuten (start minuterie bij het koken van het water). Meng af en toe zeer voorzichtig. Dan laten afkoelen op een onderzetter tot het nog warm is (ongeveer 60°) maar zeker niet kokend. De agar moet nu opgelost zijn.

De microgolfoven kan ook gebruikt worden (minst goede alternatief), in het bijzonder om kleine hoeveelheden voor te bereiden. Let op, de fles mag niet meer dan 50% gevuld worden. Zet de fles in de micro en kijk goed. Wanneer de eerste luchtbellen zichtbaar zijn, stopt de micro, en draai voorzichtig met de fles (altijd met handschoenen aan). Start de microgolf weer en herhaal de handeling 3-4 keer tot je geen onopgelost agar ziet (lijkt op kleine heldere balletjes).
Let op: wees zeer voorzichtig met agar, dit maakt snel veel schuim en loopt snel over. Bovendien zal de LB met agar super heet zijn.

Sterilisatie van glaswerk

Glaswerk om het LB medium te behandelen zoals gegradueerde pipetten, pasteurpipetten en cultuurbuizen kunnen gesteriliseerd worden in een gewone oven.
Eerst dek je glaswerk af/toe met aluminiumfolie. Gebruik een klein stuk aluminiumfolie op elke cultuurbuis als dekseltje. Indien mogelijk steriliseer de buizen in metalen rekken.
Laat vervolgens gedurende 1 uur koken op 180° (start minuterie eens de oven op temperatuur is). Laat daarna afkoelen.

Voor het voorbereidende werk is er nood aan een 5-tal gegradueerde pipetten (bv. van 10 mL);
een 3-tal Pasteur pipetten, een 5-tal cultuurbuizen en een kleine erlenmeyer (min 30 mL).
Per experimentele groep is er nood aan 10 cultuurbuizen en een 12-tal Pasteur pipetten.
Alle buizen en erlenmeyers moeten een klein aluminiumfolie dekseltje hebben. Het is best de pasteurpipetten per 12 in een pakket te plaatsen voor sterilisatie zodat een pakket kan gegeven worden aan iedere experimentele groep.


Het is natuurlijk ook mogelijk alles in gesteriliseerd plastic te kopen.


<— TERUG NAAR FLUCTUATIETEST